El sistema RPA-CRISPR/Cas12a d'aquest estudi aconsegueix una detecció ràpida (30-40 min), ultra-sensible (1 còpia/μL) d'HCMV orientant-se al gen UL123-expressat precoçment, superant els mètodes convencionals en proves de mostres clíniques. infeccions, especialment en pacients immunodeprimits, i subratlla la viabilitat dels diagnòstics basats en CRISPR-per millorar la gestió de les malalties relacionades amb l'HCMV-. La senzillesa i l'eficiència de l'assaig destaquen el seu potencial com a eina-de-atenció per a configuracions amb recursos-limitats.
Patrons de llocs d'amplificació RPA i selecció de kits.
(A) Disseny d'imprimació RPA pel que fa a la ubicació dels fragments d'amplificació. Les fletxes indiquen les posicions de la base des del principi fins al final del fragment amplificat amb els cebadors P1-P6.
(B) La imatge d'electroforesi en gel d'agarosa del producte RPA amplificada amb 6 conjunts d'imprimadors HCMV.
(C) Detecció de l'eficiència d'amplificació dels kits RPA de diferents empreses. P: Primer, NC: Control negatiu.
Els resultats van indicar que el kit AmpFuture presentava la màxima eficiència d'amplificació.
Comparació de taxes positives de MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - Fluorescent Probe Method i qPCR en mostres clíniques.
Vam recollir mostres de sang i orina de 48 pacients clínics. L'ADN genòmic es va extreure d'aquestes mostres mitjançant el kit d'ADN genòmic TIANamp, i els resultats de la detecció UL122 es van analitzar mitjançant el mètode de sonda fluorescent PCR-. Comparant els nostres resultats amb els diagnòstics clínics, els nostres mètodes van identificar 6 mostres positives que eren negatives a les proves clíniques.
