Aquí, establim sCRAM (motiu adjacent protoespaiador subòptim (PAM) -mediat per CRISPR ARN i nucleasa Cas12a combinat amb una amplificació ràpida isotèrmica multienzim), una plataforma de diagnòstic ràpida i lliure d'extracció-que detecta ASFV en 20 minuts. sCRAM integra un pas ràpid d'alliberament d'àcid nucleic (40 graus, 5 min) amb una reacció d'un-tub que combina l'amplificació isotèrmica multienzima (MIRA) i un CRISPR/ mediat per PAM-subòptim.
Sistema Cas12a (37 graus, 15 min), que permet una lectura visual gratuïta de l'instrument-a través de llum UV o tires de flux lateral (LFS).sCRAM demostra una-sensibilitat de detecció de còpia única i no presenta reactivitat-creuada amb cinc patògens comuns dels porcs (PRRSV, PPV, JEV, PCV i PRV). L'avaluació de 111 mostres simulades i clíniques (incloent sang, plasma i hisops) va revelar una concordança del 100% amb qPCR per a la lectura UV i un 98,20% per a LFS.
lectura, amb ambdós mètodes amb una especificitat del 100%. La simplicitat, la velocitat i l'adaptabilitat de camp de sCRAM subratllen el seu potencial per a la vigilància descentralitzada d'ASFV en configuracions de recursos limitats-, oferint una eina potent per a la contenció de brots.
En aquest estudi, hem desenvolupat sCRAM, una plataforma de detecció d'ASFV ràpida i desplegable{0}}de camp que integra CRISPR/Cas12a mediat per PAM-subòptim amb amplificació isotèrmica multienzim. L'assaig aconsegueix una -còpia 1 còpia/uL de sensibilitat en 20 minuts i no mostra cap reactivitat-creuada amb els principals patògens porcins. La validació clínica a través de mostres de sang, plasma i hisops va demostrar una concordança total amb qPCR mitjançant lectura de llum UV i una precisió del 98,20% mitjançant tires de flux lateral. Amb un funcionament simplificat, una gran sensibilitat i especificitat i una interpretació visual dels resultats, sCRAM ofereix un gran potencial per a la-vigilància d'ASFV al lloc i aplicacions de diagnòstic-de-atenció més amplis.
